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Tth DNA 聚合酶

发布时间:2017年07月13日

详细说明

用途

主要用于 PCR 扩增和一步法 RT - PCR ;它同时具有 DNA 聚合酶的活性和反转酶的活性;可用于实时 PCR 。

特征

• Tth DNA 聚合酶是一种热稳定性酶,分子量为 92kDa ,从 Thermus thermophilus HB-8 中分离。

• 在 74℃ 时可进行 DNA 复制,在 95℃ 的半衰期为 20 分钟。

• Tth DNA 聚合酶在镁离子存在的条件下可催化核苷酸沿 5'—3' 方向发生聚合反应,形成双链 DNA ,也可在镁离子存在的条件下,以 RNA 为模板沿 5'—3' 方向发生核苷酸聚合反应。

• 该酶也具有 5' - 3' 外切酶活力,无 3' - 5' 外切酶活力, 可用于实时荧光 PCR 。

• 能在较高的温度下进行逆转录,增加了引物杂交和延伸的特异性;减少了由于 RNA 二级结构引起的问题。

• 10× 逆转录反应缓冲液: 100mM Tris-HCl (pH 8.3 , 25℃ ), 900mM KCl ; 10×PCR 反应缓冲液: 500mM KCl, 100mM Tris-HCl (pH 9.0 , 25℃ ) 和 1 % Triton X-100 。

• 无外源核酸酶和细菌 DNA 污染。

• SDS - PAGE 检测,纯度> 95% 。

单位定义

在 70℃ 条件下, 30 分钟内催化 10nmol dNTP 的掺入反应成为 TCA 不溶性物质所需的酶量为一个单位。反应条件为: 50mM Tris-HCl (pH 9.0 , 25℃ ), 50mM NaCl, 10mM MgCl2, 200mM dNTP ( 含未标记和标记 [3H] dTTP ), 活化的小牛胸腺 DNA 作为底物。

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