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人肝癌组织源细胞提取物的背景及应用！

一、背景

人肝癌组织源细胞提取物是从人原代肝癌组织源细胞细胞提取的，人原代肝癌组织源细胞细胞从人肝癌组织组织制备。人肝癌组织源细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

人类肝细胞癌（HCC）细胞系因其亲本和患者不同而具有不同的名称。因此，根据不同来源命名的细胞系称为人肝癌细胞系。方法取临床肝癌患者术后肝癌组织,用酶消化法分离肝癌细胞,将其接种于无血清培养基中培养,并在超低粘附24孔板中观察肝癌干细胞克隆球生长情况;用MTT比色法检测肝癌干细胞克隆球增殖能力;采用流式细胞仪鉴定并分选CD90+细胞、CD90-细胞,CD133+细胞、CD133-细胞,将4种不同细胞组成CD90+细胞CD133+细胞、CD90-细胞CD133+细胞、CD90+细胞CD133-细胞及CD90-细胞CD133-细胞,分别接种于裸鼠右侧腋窝皮下观察其成瘤能力并记录肿瘤体积;将裸鼠肿瘤组织HE染色观察。

二、应用

可用于HCV E2与CD81结合对Raji细胞调节及干扰素α对人肝癌细胞信号转导途径的影响研究：

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是有包膜的单股正链RNA病毒,属于黄病毒科。HCV基因组长约9.6 kb,有一个开放阅读框架,编码的多聚蛋白前体在病毒和宿主蛋白酶的作用下形成结构蛋白(核心蛋白C以及糖基化的包膜蛋白E1、E2)和非结构蛋白(p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)。

丙型肝炎病毒E2蛋白结合CD81分子对Raji细胞激活的调节人CD81分子是HCV的细胞表面受体,可结合HCV E2蛋白。事实上HCV假病毒颗粒(HCVpp),细胞培养的HCV(HCVcc)和所有血浆来源的HCV的感染性均源自与宿主表面CD81等受体分子的结合。CD81分子为四次跨膜素家族成员,有两个胞外环,分布于包括B、T淋巴细胞、NK细胞、肝细胞在内的多种细胞表面,与细胞的活化、增殖、粘附等生物学功能密切相关,尤其对于特异性免疫应答的诱导具有重要作用。

在B细胞表面,由CD19-CD21-CD81(TAPA-1)-CD225(Leu-13)共同构成Ⅱ型补体受体复合物,该复合物与B细胞受体(BCR)共同参与B细胞活化的信号传导。B细胞的激活需要BCR以及CD19-CD21-CD81-CD225复合物与抗原的双重结合信号,其中,BCR与抗原分子中的抗原决定簇结合,而CD19-CD21-CD81-CD225复合物则通过CD21与补体C3裂解片段C3d结合(抗原与C3d结合)。

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